大口黑鱸虹彩病毒的診斷與防治

大口黑鱸是非常有代表性且發(fā)展空間巨大的特色淡水魚之一，隨著大口黑鱸人工繁殖和育苗技術(shù)的成功，大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)得到較快發(fā)展，我國(guó)大口黑鱸年養(yǎng)殖產(chǎn)量已突破70萬噸，與此同時(shí)病害問題也日益嚴(yán)重。大口黑鱸病害主要有病毒病、細(xì)菌病和寄生蟲病。其中，病毒病流行快、發(fā)病率高，并且目前尚無有效控制措施，嚴(yán)重影響大口黑鱸養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。近年來，養(yǎng)殖大口黑鱸發(fā)生大面積的暴發(fā)性流行病，導(dǎo)致大口黑鱸大量死亡，造成嚴(yán)重的損失。目前大口黑鱸的養(yǎng)殖產(chǎn)量較大，主要養(yǎng)殖區(qū)均有發(fā)病，夏季高發(fā)，發(fā)病時(shí)水溫為25～30℃，危害成魚，致死率高，給大口黑鱸魚養(yǎng)殖業(yè)造成了重大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重威脅該產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。針對(duì)這一情況，本文將重點(diǎn)介紹大口黑鱸虹彩病毒病的疾病特征及相關(guān)防控建議。

1. 病原生物學(xué)特征

大口黑鱸虹彩病毒屬于虹彩病毒科、蛙病毒屬。蛙屬虹彩病毒是虹彩病毒科中成員最多的屬。大口黑鱸虹彩病毒在溫度為28～30℃，能夠在大口黑鱸心臟細(xì)胞、藍(lán)太陽(yáng)魚鰓細(xì)胞、胖頭鱥肌肉細(xì)胞等多種魚類細(xì)胞系上增殖，并且引起細(xì)胞病變。對(duì)有機(jī)溶劑敏感，如用乙醚處理后，病毒的傳染性顯著降低，但對(duì)次氯酸鈉、碘復(fù)合物等消毒劑具有一定抵抗力。大口黑鱸虹彩病毒主要通過水平傳播和擴(kuò)散，人工感染實(shí)驗(yàn)和孵化場(chǎng)還未發(fā)現(xiàn)垂直傳播的病例。感染大口黑鱸虹彩病毒主要是通過在水體里接觸病原或者食入帶病魚餌，病毒感染恢復(fù)的魚通常也是病毒攜帶者，也是病毒的傳播源。除了魚類，實(shí)驗(yàn)室感染試驗(yàn)證實(shí)，大口黑鱸虹彩病毒在兩棲類和禽類中可以存活，水陸傳播大口黑鱸虹彩病毒存在可能。

2. 流行及臨床病理特征

1991年，大口黑鱸虹彩病毒首次在美國(guó)佛羅里達(dá)州患病大口黑鱸體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，隨后幾年大口黑鱸虹彩病毒病相繼在美國(guó)的亞拉巴馬州、佐治亞州和密西西比州等20多個(gè)州暴發(fā)，并傳播到歐洲等地區(qū)，美國(guó)源大口黑鱸虹彩病毒感染宿主范圍廣泛，涉及魚類、兩棲類、爬行類近百種水生動(dòng)物，已在多個(gè)鱸科魚類中檢測(cè)到，但大口黑鱸為敏感宿主，感染后呈現(xiàn)明顯臨床癥狀和較高的死亡率。2008年，大口黑鱸虹彩病毒首次在廣東地區(qū)發(fā)現(xiàn)，隨后在全國(guó)各地頻繁暴發(fā)，目前該病是我國(guó)大口黑鱸養(yǎng)殖中最嚴(yán)重的病害之一。大口黑鱸虹彩病毒全年均有發(fā)生，一般在夏季暴發(fā)，主要發(fā)生在25～32℃高水溫期，30℃水溫最容易暴發(fā)該病，發(fā)病率達(dá)到30%，病死率最高可達(dá)60%，死亡率與養(yǎng)殖密度、水質(zhì)、天氣、用藥和人為操作（如過塘、加水）等關(guān)系密切。大口黑鱸虹彩病毒可感染幾乎所有規(guī)格的大口黑鱸，對(duì)中小規(guī)格魚種危害最大、致死率最高。

不同規(guī)格的大口黑鱸感染大口黑鱸虹彩病毒的癥狀差異很大。小規(guī)格苗種（3～5cm）感染，常見病魚腹部中央有紅點(diǎn)；大規(guī)格苗種（6～10cm）感染，則以體表大量斑點(diǎn)狀潰瘍?cè)罨蝾^部、鰓頰紅腫出血為主，有時(shí)可見肝臟出現(xiàn)白斑（不同于諾卡氏菌感染引起的肝臟結(jié)節(jié)，此白斑僅出現(xiàn)于肝臟，且觸感較滑）；中成魚階段（50～200g/尾），則以體表大面積深度潰瘍?yōu)橹?，但往往由于存在其他病原混合感染而表現(xiàn)出多種復(fù)雜的癥狀。病理分析發(fā)現(xiàn)，患病大口黑鱸病灶出現(xiàn)嚴(yán)重壞死性肌炎，壞死的肌纖維周圍有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；肝內(nèi)可見多灶性壞死，在壞死區(qū)可見肝細(xì)胞核固縮及細(xì)胞碎片分布；脾臟細(xì)胞廣泛性壞死伴淋巴細(xì)胞減少；腎內(nèi)腎間質(zhì)壞死，腎小管上皮變性壞死。

患病大口黑鱸體表癥狀

3. 疾病診斷

（1）臨床癥狀診斷。患病的大口黑鱸一般表現(xiàn)出嗜睡，食欲不振，游動(dòng)緩慢，有潰瘍和肌肉壞死等潰瘍綜合征的典型癥狀，體表可見多處潰爛及出血點(diǎn)，鰭條基部、尾柄處紅腫出血。解剖可見魚鰾膨大，布滿紅色氣腺，有時(shí)魚鰾中有黃色或褐色蠟樣分泌物。脾臟腫大，顏色暗紅發(fā)黑，肝臟發(fā)白并有出血點(diǎn)。大口黑鱸虹彩病毒可以導(dǎo)致大面積魚暴發(fā)死亡，也有部分魚并不表現(xiàn)任何癥狀，呈隱性帶毒。

（2）病毒分離培養(yǎng)。大口黑鱸虹彩病毒廣州株感染胖頭鱥肌肉細(xì)胞8h后，細(xì)胞間隙變大，細(xì)胞貼壁程度下降，與對(duì)照組相比可見細(xì)胞形態(tài)縮小，有少量的圓形細(xì)胞變亮；感染12h后，部分區(qū)域出現(xiàn)小的空洞，少量細(xì)胞死亡脫落，漂浮至上層液體中；感染16h后，小空洞逐漸增多；感染20h后，小空洞邊緣的細(xì)胞逐漸脫離，此時(shí)上層液體已經(jīng)渾濁，漂浮著大量死亡細(xì)胞；感染24h后，僅剩約20%的細(xì)胞貼壁，視野中可見大空洞形成網(wǎng)狀。同時(shí)，未感染的陰性對(duì)照組細(xì)胞一直呈單層生長(zhǎng)，形態(tài)正常，貼壁狀態(tài)良好。

（3）電鏡檢測(cè)。大口黑鱸虹彩病毒顆粒呈二十面立體晶格狀排列, 并且可見具有衣殼和核心的成熟病毒顆粒和正在裝配僅有衣殼的未成熟病毒顆粒，細(xì)胞核出現(xiàn)核物質(zhì)邊緣化。

（4）核酸檢測(cè)。普通PCR檢測(cè)方法：提取病魚組織的DNA，采用大口黑鱸虹彩病毒檢測(cè)引物（可選擇上游引物F:5'-TATGTGCTCAACTCTTGGCTGGTC-3'和下游引物R:5'-CCACGATGGGCTTGACTTCTCC-3'，擴(kuò)增片段大小為475 bp）PCR擴(kuò)增后，進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，根據(jù)有無目的條帶即可判定，也可進(jìn)一步測(cè)序后，進(jìn)行核苷酸序列比對(duì)確定病毒種類。實(shí)時(shí)熒光定量檢測(cè)方法：提取病魚組織的DNA，采用大口黑鱸虹彩病毒TaqMan實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行檢測(cè)，通過Ct值大小即可判定是否感染大口黑鱸虹彩病毒。

4. 疾病防控措施

目前，無防治大口黑鱸虹彩病毒病的有效藥物和疫苗，苗種檢疫及感染初期的正確處置是控制該病暴發(fā)的主要措施。

（1）加強(qiáng)苗種檢疫，選購(gòu)無攜帶病原的苗種。在放養(yǎng)魚苗前，務(wù)必進(jìn)行苗場(chǎng)檢疫，檢測(cè)大口黑鱸常見病毒如大口黑鱸虹彩病毒、傳染性脾腎壞死病毒、大口黑鱸彈狀病毒等，選購(gòu)無攜帶病原的苗種。

（2）加強(qiáng)日常的防護(hù)工作。在養(yǎng)殖過程中，一方面，以微生物制劑等調(diào)水為主，盡量避免換水，如確需換水，應(yīng)先了解近期周邊有無發(fā)病池塘排水，確保在水源質(zhì)量良好時(shí)進(jìn)行，換水后及時(shí)使用復(fù)合碘等進(jìn)行水體消毒，以免從水源感染。另一方面，以投喂人工配合飼料為主，盡量避免使用凍蟲、冰鮮漿等不潔餌料，這些餌料存在一定的攜帶病原風(fēng)險(xiǎn)，也容易引起魚體消化不良，降低免疫力，從而誘發(fā)病害。此外，環(huán)境的劇變，如水溫的升高、溶氧含量偏低、拉網(wǎng)刺激等，會(huì)引起魚體的強(qiáng)烈應(yīng)激，也容易導(dǎo)致魚體抵抗力下降而暴發(fā)病害。建議可定期拌喂保健成分，以增強(qiáng)魚體體質(zhì)，同時(shí)在強(qiáng)應(yīng)激事件前后潑灑?；撬?、維生素C等，也可一定程度減緩魚體的應(yīng)激，減小發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。

（3）疫苗保護(hù)。目前，國(guó)內(nèi)不少科研機(jī)構(gòu)在攻關(guān)大口黑鱸虹彩病毒、大口黑鱸彈狀病毒等常見病毒疫苗。據(jù)報(bào)道，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)驗(yàn)證大口黑鱸虹彩病毒滅活疫苗對(duì)大口黑鱸免疫保護(hù)率約為18%～23%，而大口黑鱸虹彩病毒的DNA疫苗效果相對(duì)較好，對(duì)強(qiáng)毒株的人工感染存活率可以達(dá)到60%以上，但尚未有大口黑鱸虹彩病毒的疫苗產(chǎn)品上市，在養(yǎng)殖過程中以預(yù)防為主，治療為輔的策略，加強(qiáng)日常管理與防控工作更為關(guān)鍵。

來源：科學(xué)養(yǎng)魚雜志社

作者：仲愷農(nóng)業(yè)工程學(xué)院 蘇友祿

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