聯(lián)系我們
地址:慶市川區道(原雙竹鎮)
13983250545

信:ycsh638

QQ:469764481
郵箱:ycsh6318@163.com

一株霍亂弧菌的分離鑒定和治療藥物篩選

發(fā)表時(shí)間:2024/03/25 07:52:57  來(lái)源:科學(xué)養魚(yú) 2022年6期  瀏覽次數:2205  
字體大小: 【小】 【中】 【大】
西南漁業(yè)網(wǎng)-豐祥漁業(yè)網(wǎng)秉承:求是務(wù)實(shí)不誤導不夸大不炒作!水產(chǎn)專(zhuān)業(yè)網(wǎng)站為您提供優(yōu)質(zhì)服務(wù)!【鄭重提醒】:本站所有文章,如需轉載請注明出處,否則謝絕轉載??!謝謝合~
市場(chǎng)在變,我們的誠信永遠不會(huì )變!

一株霍亂弧菌的分離鑒定和治療藥物篩選

沈 飛,孫瑜翀,竇梓韞,呂利群

(上海海洋大學(xué)國家水生動(dòng)物病原庫,上海 201306)

2020年8月,佛山市杏壇鎮一養殖場(chǎng)出現太陽(yáng)魚(yú)暴發(fā)性死亡。5月開(kāi)始發(fā)病,瀕死魚(yú)可見(jiàn)體表輕微發(fā)紅,死魚(yú)全身發(fā)紅,解剖可見(jiàn)內臟出血發(fā)紅,當地人稱(chēng)之為“紅身病”。該病發(fā)展迅速,第1天死魚(yú)一二十尾,第2天達上百尾,第3天達三五百尾,呈翻倍增多,控制不及時(shí)日死亡量可達幾千尾,死亡率約70%。為查明病因,本實(shí)驗室通過(guò)生理生化指標、分子生物學(xué)技術(shù)和人工感染實(shí)驗確定了一株優(yōu)勢株,并進(jìn)行抗生素和消毒劑篩選,為該病的臨床診斷和藥物防治提供參考。

一、材料和方法

1.實(shí)驗材料

筆者將具有典型紅身癥狀的患病個(gè)體作為研究材料,記錄病魚(yú)的體征和癥狀,解剖以觀(guān)察內臟的病理變化。健康太陽(yáng)魚(yú)也來(lái)自該養殖場(chǎng),體質(zhì)量50~80克,暫養1周后用于攻毒實(shí)驗。

LB瓊脂、MH瓊脂和革蘭氏染色試劑盒購自北京索萊寶科技有限公司;HBI霍亂弧菌生化鑒定條(SN)、TCBS瓊脂購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司;基因組DNA提取試劑盒,2×TaqPCR MasterMix(不含染料)購自天根生化科技(北京)有限公司;水產(chǎn)消毒劑產(chǎn)品購自山西爭躍藥業(yè)有限公司;PCR引物合成及產(chǎn)物測序由生工生物工程(上海)股份有限公司完成。

2.病原菌分離鑒定

取瀕死的有明顯紅身癥狀的太陽(yáng)魚(yú),無(wú)菌操作下用75%酒精棉球擦拭魚(yú)體,解剖并取其肝、脾、腎組織劃線(xiàn)接種于LB瓊脂培養基,30℃下培養24小時(shí)后挑取單菌落純培養。將分離純化后的單菌落接種于TCBS培養基,30℃下培養24小時(shí)后進(jìn)行菌落形態(tài)觀(guān)察。參照《進(jìn)出口食品中霍亂弧菌檢驗方法》(SN/T1022-2010),按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行生理生化鑒定。

用天根細菌DNA提取試劑盒提取細菌DNA,用16SrDNA通用引物(27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG;1492R:GGTTACCTTGTTACGACTT)和霍亂弧菌pntA特異性引物(F:CAGTAAAGAAACGACCAAACTC;R:TGCCAGTTTCGATGATGCCG)進(jìn)行PCR鑒定,將預期大小的PCR產(chǎn)物送至生工生物工程(上海)股份有限公司進(jìn)行測序。

3.藥敏分析和消毒劑篩選

采用藥敏紙片法篩選敏感抗生素,采用二倍稀釋法測定消毒劑對菌的最小殺菌濃度和最小抑菌濃度。消毒劑濃度為2048、1024、512、256、128、64、32、16、8、4、2、0毫克/升。

二、結果

1.病理特征及菌落特性

病魚(yú)最明顯的外部特征是體表發(fā)紅(圖1A),解剖后發(fā)現肝臟有出血(圖1B)。分離株命名為SF01,在TCBS瓊脂培養基中菌落為黃色(圖1C)。

圖1 病魚(yú)臨床體征及菌落形態(tài)

2.生理生化鑒定

生化鑒定結果(表1)顯示,SF01氧化酶陽(yáng)性,能利用蔗糖和甘露糖分解鳥(niǎo)氨酸脫羧酶和精氨酸雙水解酶,與霍亂弧菌的生理生化指標基本符合。

表1 SF01生理生化特征

3.16SrDNA和pntA檢測結果及系統進(jìn)化樹(shù)構建

測序與系統進(jìn)化樹(shù)結果顯示,SF01與V.choleraeNR.044853、V.choleraeNR.115936聚為一枝,具有較近的親緣關(guān)系?;趐ntA設計的霍亂弧菌特異性引物擴增出338bp的產(chǎn)物,綜合其菌落形態(tài),生理生化特征可判定分離株為霍亂弧菌。

4.藥物敏感分析

藥敏分析結果(表2)表明,分離株SF01對恩諾沙星、卡那霉素、頭孢哌酮舒巴坦、強力霉素、磺胺復合物、氟苯尼考、利福平、氧氟沙星、磷霉素和環(huán)丙沙星極敏感,對阿奇霉素、頭孢呋新鈉、諾氟沙星、慶大霉素、鏈霉素、新霉素和妥布霉素高度敏感,對氨芐西林中敏,對新諾明和林可霉素表現為耐藥。通過(guò)二倍稀釋法測量消毒劑對分離菌SF01的最小抑菌濃度(MIC),并挑選效果較好的消毒劑殺毒先鋒、草鯽五病靈、草魚(yú)烏頭黑病靈、菌迪、暴血安、魚(yú)用暴血止和菌血立停測量最小殺菌濃度(MBC),結果見(jiàn)表3。由表3可知,消毒劑菌迪、魚(yú)用暴血安和暴血止等對分離菌的消毒效果最好,聚維酮碘效果較差。

表2 SF01藥敏試驗

表3 二倍稀釋法測定的MIC、MBC

三、小結

養殖場(chǎng)采用氟苯尼考內服,魚(yú)的日死亡量控制在100尾以下,直至無(wú)病魚(yú)出現,之后每月使用1次對分離株效果較好的消毒劑進(jìn)行消毒,可以預防霍亂弧菌的暴發(fā)。

聲明:轉載文是出于傳遞更多信息之目的。若有標注錯誤或侵犯了您的合法權益,請與本網(wǎng)聯(lián)系,我們將及時(shí)更正、刪除,謝謝!
“養魚(yú)第一線(xiàn)”微信公眾訂閱號頭條@漁人劉文俊

關(guān)"養魚(yú)第一線(xiàn)"微信公眾帳號和頭條號!將會(huì )定期向你推送本號信息!將為你精誠服務(wù)!

文章評論
發(fā)表評論:(匿名發(fā)表無(wú)需登錄,已登錄用戶(hù)可直接發(fā)表。) 登錄狀態(tài): 未登錄,點(diǎn)擊登錄
電腦網(wǎng)址: http://www.dollarslicenewyork.com 地址:重慶市永川區衛星湖街道  手機網(wǎng)址:http://m.yc6318.cn
重慶市永川區雙竹漁業(yè)協(xié)會(huì ),重慶市永川區水花魚(yú)養殖專(zhuān)業(yè)合作社,重慶吉永水產(chǎn)品養殖股份合作社,重慶市永川區豐祥漁業(yè)有限公司
本站聯(lián),微信:ycsh638,QQ:469764481,郵箱:ycsh6318@163.com

ICP網(wǎng)備案/許可證號渝ICP備2020014487號-1

渝公網(wǎng)安備50011802010496號

誠信共建聯(lián)盟